NY∕T 2466-2013 大麦品种鉴定技术规程 SSR分子标记法(农业)
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ID： |
C3991E22BF5343D3AE678890AAE2CAA1 |
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文件大小(MB)： |
0.34 |
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页数： |
16 |
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日期： |
2021-12-27 |
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ICS 65.020.20,B 05 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 2466一2013,大麦品种鉴定技术规程,SSR.分子标记法,Identification of barley varieties-SSR marker method,2013-12-13 发布2014 一04-01 实施,中华人民共和国农业部发布,NYjT 2466-2013,目次,前言…………………………………………………………………………………………………………… H,1 范围..,2 规范性引用文件……..………………………………………………………………………………………. 1,3 原理……,4 仪器设备及试剂…,5 溶液配制,6 引物.,7 参照品种及其使用…..…… 1,8 操作程序………………………………………………………………………………………………………………… 1,9 等位变异数据采集……..…..……………………………………………………………………… 3,10 判定标准……..…………………………………………………………………………………..……….. 4,附录A(规范性附录) 仪器设备及试剂,附录B(规范性附录) 溶液配制…..,附录C(规范性附录) 核心引物.….,附录D( 资料性附录) 参照品种名单….,I,NY/T 2466-2013,E,前言,本标准按照GB/T 1. 1-2009 给出的规则起草,请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任,本标准由农业部种子管理局提出,本标准由全国植物新品种测试标准化技术委员会(SAC/TC 277) 归口,本标准起草单位:江苏省农业科学院、农业部科技发展中心,本标准主要起草人:王艳平、沈奇、堵苑苑、张继红、李华勇、王显生、吴燕、戴剑,NY/T 2466一2013,大麦品种鉴定技术规程SSR 分子标记法,1 范围,本标准规定了利用简单重复序列( Simple 吕equence repeats.SSR) 分子标记进行大麦( Hordeum,vulgl1 re L. )品种鉴定的试验方法、数据记录格式和判定标准,本标准适用于大麦DNA 分子数据的采集和品种鉴定,2 规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件.仅注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件,GB/T 3543.2 农作物种子检验规程杆样,GB/T 19557.1 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则,NY/T 2224-2012 植物新品种特异性、→致性和稳定性测试指南大麦,3 原理,SSR 广泛分布于大麦基因组中.不同品种间每个SSR 位点重复单位的数量可能不同。由于每个,SSR 位点两侧的序列是高度保守和单拷贝的，因而可根据其两侧的序列设计一对特异引物，利用PCR,技术对两条引物间的DNA 序列进行扩增。在电泳过程中.主要由于SSR 位点重复单位的数量不同引,起的不同长度的PCR 扩增片段在电场作用下得到分离，经硝酸银染色或者荧光染料标记加以区分。因,此，根据SSR 位点的多态性，利用PCR 扩增和电泳技术可以鉴定大麦品种,4 仪器设备及试剂,仪器设备及试剂见附录A ,5 溶液配制,溶液配制方法见附录Bo,6 引物,引物相关信息见附录c,7 参照品种及其使用,参照品种的名称见附录C ，参照品种的来源参见附录D ,在进行等位变异检测时，应同时包括相应参照品种的PCR 扩增产物,注1: 多个品种在某二SSR 位，点上可能都具有相同的等位变异。在确认这些品种该位点等位变异大小与参照品种,相同后.这些品种也可以代替附录D 中的参照品种使用,注2. 同一名称不同来源的参照品种的某一位点上的等位变异可能不相同.在使用其他来糠的参照品种时.应与原参,照品种核对.确认无误后使用,注3. 对于附录C 中未包括的等位变异.应按本标准方法.确定其大小和对应参照品种,8 操作程序,8. 1 样晶准备,NY/T 2466-2013,8. 1. 1 分析和保存,种子样品的分样和保存，应符合GB/T 3543.2 的规定,8. 1.2 分析,每份样品检测10 个个体(种子、叶片或其他器官组织) ，混合分析。对一致性差的样品每个个体单,独分析,8.2 DNA 提取,取大麦的幼苗或叶片0.5 g ，剪碎，放入2mL 离心管中。往离心管中加入液氮，放入研磨仪，磨成粉,状后立即加人预热的DNA 提取液800μL 左右，剧烈摇动混匀，并在65 0C 水浴中保温30 mìn~50 mìn,其间可摇动几次。冷却至室温加入等体积三氯甲烧一异戊醇(24 : 1)，颠倒氓匀，室温下静置5 mìn~10,mln ，使水相和有机相分层。12000 g 离心10 mino 移取上清液至另一个2mL 离JL' 管中，加入约1. 5 倍,体积的预冷乙醇，轻缓颠倒漉匀，经12000 g 离心3 min 至分相，弃上清液。用70% 乙醇溶液洗涤2 遍,自然条件下干燥后，加入50μL 1XTE 缓冲液熔解沉淀。用紫外分光光度计检测DNA 浓度，将DNA,稀释到20 ng/μL。置于一20 0C 保存备用,注:其他所获DNA 质量能够满足PCR 扩增需要的DNA 提取方法都适用于本标准,8.3 PCR 扩增,8. 3. 1 反应体系,25μL 的反应体积(或12.5μL)，含dNTPs2. 5 mmol/ L，正向引物10μmol/L，反向引物10μmo l/,L.Taq DNA 聚合酶1. 0 单位， ……
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